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      1. 操作指南

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        染色體顯帶技術常用的有熒光Q-帶、Giemsa G-帶、異染色質的C-帶等。這里介紹較為常的Giensa G -C-帶技術。

        1. G-顯帶染色體標本的制備

        方法一:

        1)將配制好的0.25%的胰蛋白酶溶液60毫升倒入立式染色缸內,37℃水溶預熱,用3% Tris調pH=7

        2)將標本片浸入胰酶溶液中,不斷輕輕擺動,新鮮標本只需處理3-9秒鐘,老標本則需處理3-5分鐘。

        3)立即投入110120Giemsa工作液,染色15-20分鐘

        4)自來水沖凈,氣干。

        方法二:

        145毫升生理鹽水或雙蒸水倒入立式染色缸內,加入已配好的2%胰酶液5毫升,用3% Tris溶液調pH=737℃預熱。

        2)把染色體標本片浸入37℃上述胰酶工作液中,略加搖動,處理30秒左右。

        3)取出后立即用110Giemsa工作液染色8-10分鐘,自來水沖凈。

        注意事項

        ①胰酶的品質會直接影響顯帶的質量,購買品牌試劑較保險。

        ②胰酶的活性與pH值和溫度有關,在pH=7溫度37℃狀態下,胰酶活性最高。

        ③胰酶處理時間長短與標本片片齡有關,新鮮的標本處理時間短,且帶紋較清晰,建議標本片的片齡在2-7天內較適宜。

        Giemsa工作液要現用現配

        ⑤胰酶工作液長時間置37℃水浴,容易渾濁污染,應棄之。

        2. C-帶染色體標本的制備

        C顯帶特點:對染色體中的結構性異染色質容易染色,對常染色質只能顯示較淡的輪廓。

        C顯帶所顯示著較深的結構部位:

        ①各染色體的著絲粒;

        ②各近端著絲粒的部位;

        ③在1、9、16號染色體具有次縊痕的位置上;

        Y染色體的長臂遠端,此部分系Y染色質部分。其它部分著色很淡。

        核型分析過程,對某些染色體變異問題,往往需要C顯帶技術與G顯帶技術結合分析,更能準確判斷染色體、體的畸變。

        方法一:

        1)將常規制備染色體標本片放入0.2NHCL溶液中,室溫下,處理15-30分鐘;

        2)自來水沖凈后,再將標本片浸入預溫到65℃的5% Ba(OH)2溶液中,處理10分鐘;

        3)自來水沖凈后,再把標本片投入預溫到65℃的2×SSC溶液中,處理1-1.5小時;

        4)自來水沖凈后,用110 Giemsa工作液染色0.5-1小時;

        5)自來水沖凈,氣干。

        方法二:

        1)將制好的標本片放入0.2N HCL中,室溫下1小時;

        2)水洗凈(均用自來水沖洗);

        3)浸入1% Ba(OH)2水溶液中,溫度預熱到50℃,處理時間15-20秒;

        4)水洗凈

        5)浸入預溫到60℃的2×SSC溶液中,處理90分鐘。

        6)用水徹底沖凈;

        7110 Giemsa染色液染色10-15分鐘

        8)水沖凈、氣干。

        注意事項

        ①標本片年齡不能超過一個月;

        ②各種處理溶液一定要達到所需的溫度時,才放入表本片進行處理;

        ③每一步處理后,要立即用自來水徹底沖凈后,才進行下一步處理。




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